你需要(want)知道的(of)生(born)物指示劑的(of)管理

2023-05-10 13:58:59

大(big)多數藥企都會涉及到(arrive)滅菌工藝，即使沒有無菌産品，也會涉及到(arrive)微生(born)物實驗用(use)品的(of)滅菌。那就必然會涉及到(arrive)生(born)物指示劑，在(exist)生(born)物指示劑的(of)選擇、使用(use)以(by)及日常管理中我(I)們(them)應該注意哪些問題呢？下面我(I)們(them)就商業化生(born)物指示劑一(one)系列的(of)管理來(Come)給大(big)家做個(indivual)梳理。

01

相關定義

生(born)物指示劑  是(yes)一(one)種對特定滅菌程序有确定及穩定耐受性的(of)特殊活微生(born)物制成品， 可用(use)于(At)滅菌設備的(of)性能确認，特定物品的(of)滅菌工藝研發、建立、驗證，生(born)産過程滅菌效果的(of)監控，也可用(use)于(At)隔離系統和(and)無菌潔淨室除菌效果的(of)驗證評估等。
D值  将試驗微生(born)物殺滅90%所需的(of)滅菌時(hour)間或滅菌劑量。

02

生(born)物指示劑的(of)分類


按照《中國藥典》2020年版四部9207 滅菌用(use)生(born)物指示劑指導原則，可将生(born)物指示劑分爲(for)以(by)下三類（與EP 5.1.2、USP 1229.5規定一(one)緻）：

載體型生(born)物指示劑：該類生(born)物指示劑是(yes)由微生(born)物芽孢和(and)載體經包裝而成，載體可以(by)是(yes)碟形或條狀的(of)濾紙、玻璃、塑料或其他(he)材料。

芽孢懸液生(born)物指示劑：該類生(born)物指示劑是(yes)将芽孢混懸于(At)液體中。若用(use)于(At)液體物品滅菌，必須測定生(born)物指示劑在(exist)滅菌液體物品中的(of)芽孢數和(and)D值。

自含式生(born)物指示劑：該類生(born)物指示劑是(yes)由芽孢和(and)能夠恢複微生(born)物生(born)長的(of)培養基組成的(of)系統，其耐受性是(yes)針對整個(indivual)系統而言。

但EP5.1.2中還有一(one)類，叫“Custom-made biological indicators”，也就是(yes)定制生(born)物指示劑，顧名思義就是(yes)根據産品或項目特點定制的(of)指示劑，通常不(No)具商業購買價值，也不(No)在(exist)咱們(them)讨論範圍内。

03

生(born)物指示劑的(of)選擇


1、測試微生(born)物種類的(of)選擇，可以(by)根據滅菌方式選擇使用(use)什麽指示劑種類，總結如下表：

滅菌方式 指示劑種類
濕熱滅菌 嗜熱脂肪地(land)芽孢杆菌（過度殺滅法）——ChP、EP、USP
生(born)孢梭菌（熱不(No)穩定性物品）——ChP
枯草芽孢杆菌（熱不(No)穩定性物品）——ChP
凝結芽孢杆菌（熱不(No)穩定性物品）——ChP
幹熱滅菌 萎縮芽孢杆菌——ChP、EP、USP
環氧乙烷滅菌 萎縮芽孢杆菌——ChP、EP、USP
過氧化氫滅菌 嗜熱脂肪地(land)芽孢杆菌——ChP、EP、USP

《中國藥典》2020年版在(exist)濕熱滅菌法中，除了(Got it)嗜熱脂肪地(land)芽孢杆菌外還收載了(Got it)用(use)于(At)熱不(No)穩定性物品滅菌的(of)其他(he)三種生(born)物指示劑，那什麽叫熱不(No)穩定性物品的(of)滅菌程序呢？在(exist)中國GMP無菌附錄第六十一(one)條中描述最終滅菌爲(for)“無菌藥品應當盡可能采用(use)加熱方式進行最終滅菌，最終滅菌産品中的(of)微生(born)物存活概率（即無菌保證水平，SAL）不(No)得高于(At)10-6。采用(use)濕熱滅菌方法進行最終滅菌的(of)，通常标準滅菌時(hour)間F0值應當大(big)于(At)8，流通蒸汽處理不(No)屬于(At)最終滅菌。”，最終滅菌通常要(want)求F0大(big)于(At)8，當F0大(big)于(At)12時(hour)屬于(At)過度滅菌，其他(he)不(No)适合過度滅菌的(of)就采用(use)F0大(big)于(At)8這(this)種情況。比如有些培養基會明确規定115℃滅菌30min。

2、芽孢總數

同樣在(exist)中國GMP無菌附錄第六十一(one)條中描述“最終滅菌産品中的(of)微生(born)物存活概率（即無菌保證水平，SAL）不(No)得高于(At)10-6。”，滅菌程序确認采用(use)的(of)生(born)物指示劑芽孢總數通常應不(No)低于(At)106。關于(At)生(born)物指示劑濃度的(of)具體确定可以(by)結合PDA TR1 Validation of Moist Heat Sterilization Processes：Cycle Design , Development ,Qualification and Ongoing Control進行。

3、D值

根據滅菌方式選擇生(born)物指示劑的(of)D值，可以(by)參考ISO 11138：2017系列滅菌标準來(Come)選擇D值，總結如下：
幹熱滅菌用(use)萎縮芽孢杆菌生(born)物指示劑：在(exist)160℃時(hour)D值≥2.0min；
濕熱滅菌用(use)嗜熱脂肪地(land)芽孢杆菌生(born)物指示劑：在(exist)121℃時(hour)D值≥1.5min；
環氧乙烷滅菌用(use)萎縮芽孢杆菌生(born)物指示劑：在(exist)54℃時(hour)D值≥2.5min；
隻做國内項目時(hour)，也可以(by)參考《中國藥典》2020年版9207中列出(out)的(of)商品化生(born)物指示劑的(of)典型特征實例：

過氧化氫滅菌用(use)嗜熱脂肪地(land)芽孢杆菌生(born)物指示劑，目前還未見到(arrive)有法規或指南對其D值進行明确的(of)要(want)求。
4、供應商的(of)選擇
在(exist)歐盟GMP附錄1的(of)8.43中，有要(want)求“Suppliers should be qualified and transportation and storage conditions should be controlled in order that BI quality is not compromised”（供應商應具有資質，并應控制運輸和(and)儲存條件，以(by)免影響BI 質量）。因此我(I)們(them)選擇供應商應注意收集并确認供應商的(of)相關資質。



04

生(born)物指示劑的(of)驗收


在(exist)接收到(arrive)新購買的(of)生(born)物指示劑後，我(I)們(them)除了(Got it)跟其他(he)物料一(one)樣進行品名、數量、包裝、供應商、有效期等基礎信息核對外，還應在(exist)驗收前按照前面所述各生(born)物指示劑的(of)D值要(want)求對其進行評估，必要(want)時(hour)進行D值測定（芽孢懸液生(born)物指示劑）。實驗室驗收時(hour)應進行微生(born)物純度和(and)形态的(of)鑒定及測定微生(born)物數量。微生(born)物數量測定方法參照《中國藥典》2020年版四部9208生(born)物指示劑耐受性檢查指導原則中的(of)總芽孢計數，純度和(and)形态的(of)鑒定可采用(use)計數時(hour)培養結果進行菌落形态和(and)細菌染色法來(Come)判斷。如有必要(want)則進行生(born)物指示劑種屬的(of)鑒定（如在(exist)異常結果調查時(hour)）。

需要(want)注意的(of)是(yes)在(exist)濕熱滅菌工藝中，生(born)物指示劑的(of)使用(use)是(yes)通過生(born)物學的(of)方法來(Come)驗證其滅菌效果，隻要(want)D值足夠，即使初始微生(born)物數量低于(At)106，使用(use)生(born)物指示劑仍然可以(by)驗證其滅菌效果（可以(by)結合PDA TR1 Validation of Moist Heat Sterilization Processes：Cycle Design , Development ,Qualification and Ongoing Control中Fbio相關内容确定D值與初始濃度的(of)組合）。


05

生(born)物指示劑的(of)儲存


生(born)物指示劑應在(exist)标示條件或驗證條件下進行儲存、避光、遠離毒性物質，防止過熱和(and)潮濕。一(one)般芽孢懸液生(born)物指示劑和(and)自含式安瓿生(born)物指示劑是(yes)需要(want)2-8℃冷藏保存的(of)，其他(he)的(of)是(yes)室溫保存。



06

生(born)物指示劑的(of)使用(use)


在(exist)有效期内使用(use) 這(this)個(indivual)不(No)難理解，超過效期保證不(No)了(Got it)品質。

按照預定用(use)途使用(use) 必須要(want)強調一(one)下，不(No)同滅菌用(use)途的(of)生(born)物指示劑不(No)能夠混用(use)。比如雖然同是(yes)嗜熱脂肪地(land)芽孢杆菌的(of)生(born)物指示劑，有濕熱滅菌用(use)的(of)，也有過氧化氫滅菌用(use)的(of)，絕對是(yes)不(No)能混用(use)的(of)。

使用(use)時(hour)須有陽性對照 即使用(use)未經滅菌過程的(of)生(born)物指示劑同法培養，陽性對照生(born)物指示劑應與參與滅菌測試的(of)生(born)物指示劑爲(for)同一(one)批次。

按照說明書規定的(of)溫度和(and)時(hour)間進行培養 生(born)物指示劑在(exist)完成滅菌後需在(exist)4小時(hour)之内接種到(arrive)相應培養基中進行培養。生(born)物指示劑因爲(for)使用(use)的(of)菌種其不(No)同培養方式也是(yes)不(No)同的(of)，一(one)般要(want)按照說明書規定的(of)培養溫度及時(hour)間進行培養（如果是(yes)國際化項目，建議按照ISO11138和(and)USP 55的(of)要(want)求，至少培養7天）。自含式生(born)物指示劑需要(want)滅菌後擠壓玻璃管釋放培養基，且應在(exist)培養基冷卻至室溫後再進行擠壓（不(No)超過4h），以(by)免影響測試結果或對人(people)員造成危險。

生(born)物指示劑應放在(exist)恰當的(of)位置 比如濕熱滅菌的(of)冷點、滅菌氣體不(No)容易到(arrive)達的(of)地(land)方等經滅菌驗證評估出(out)的(of)薄弱點或者關鍵點。使用(use)過氧化氫氣相滅菌時(hour)，建議在(exist)每個(indivual)點位放置多個(indivual)生(born)物指示劑以(by)更充分的(of)支持滅菌過程。在(exist)放置生(born)物指示劑時(hour)應标明具體的(of)位置、滅菌日期等關鍵信息。

不(No)能對生(born)産或者其他(he)檢測過程造成污染 使用(use)生(born)物指示劑時(hour)，應當采取嚴格管理措施，防止由此所緻的(of)微生(born)物污染。



07

生(born)物指示劑的(of)銷毀


發生(born)以(by)下情況時(hour)需要(want)對生(born)物指示劑進行銷毀處理：

——使用(use)過的(of)生(born)物指示劑（不(No)論培養後是(yes)否長菌）

——過有效期的(of)生(born)物指示劑

——使用(use)前檢查包裝不(No)完整、破損的(of)生(born)物指示劑

在(exist)丢棄之前應按照生(born)産商推薦的(of)方式進行滅菌處理。一(one)般可以(by)是(yes)121℃、30min滅菌或焚燒。

作(do)者：劉環宇

審核：魏巍、王孝東

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